Determinarea punctului izoelectric
Moleculele de proteine sunt libere carboxil și amină grupări, astfel încât acestea pot fi disociate ca un acid și bază t. E. Sunt electroliți amfoteri.
Soluția alcalină este suprimată prin disocierea grupărilor amino ale proteinelor incarcate negativ molecula si se comporta ca anioni.
In mediu acid, având ca rezultat suprimarea disocierii grupărilor carboxil, proteinele încărcate pozitiv, adică Acestea sunt cationi.
La o anumită aciditate a soluției, care se numește punctul izoelectric (IEP) în molecula de proteină este stabilită sarcini pozitive și negative egale, devine electric neutru. Poziția punctului izoelectric depinde de conținutul și natura grupărilor acide sau bazice în molecula de proteină. Majoritatea proteinelor vegetale IEP este într-un mediu slab acid.
Punctul izoelectric al proteinei are cea mai mică solubilitate și ușor precipită sub influențe care reduc hidratarea moleculelor sale (cu adaos de solvenți organici sau săruri). Când acest moleculele de proteine se coaguleze, formând particule mai mari și cad din soluție sub formă de precipitat.
1. Prepararea soluțiilor de proteine. Din preparatele proteice obținute luând probe de 0,25 g în flacoane se toarnă în 5 ml de 0,5N. soluție SN3SOONa și dizolvat sub încălzire într-o baie de apă. Apoi, volumul este ajustat cu apă la 25 ml.
Soluțiile preparate au fost utilizate pentru a determina punctul izoelectric al proteinelor. Pentru comparație, am de asemenea proteine de ou folosit diluat de 10 ori cu apă și se filtrează prin două straturi de tifon.
2. Definiția IEP. Cele 8 tuburi numerotate Se pipetează 1 ml de soluție de proteină se toarnă apă și 0,01 N. sau 0,1N. soluție de acid acetic în kolichestvah.Zatem turnată în fiecare tub de 2 ml de acetonă sau un alcool, conținutul a fost agitat și lăsat timp de 30-40 minute la temperatura camerei. La un pH de la sau în apropierea pl de proteine, soluția devine tulbure și precipită. Tabelul nota intensitatea precipitațiilor sau lipsa acestora. Pe baza acestor rezultate concluzionăm asupra stării punctului izoelectric al proteinelor analizate.
Materiale si echipamente: 0,5N. soluție de acetat de sodiu (68,5 g SN3SOONa.3N2O în 1 L), 0,1N. soluție CH3COOH (6 ml acid acetic glacial se diluează cu apă până la un litru) de 0,01. soluție CH3COOH preparată prin diluarea 0,1 N. Soluție CH3COOH de 10 ori, etanol, acetonă, proteine de ou, semințe de cereale și leguminoase sau izolate din aceste proteine, fiole, balon cotat de 25 ml, stativele.
Știri asociate: